亓磊（Lei Stanley Qi）教授

斯坦福大學(xué)亓磊（Lei Stanley Qi）教授早年畢業(yè)于清華大學(xué)，現(xiàn)任斯坦福大學(xué)生物工程學(xué)、化學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)系的助理教授，近年來(lái)他在CRISPR研究領(lǐng)域取得了一系列突破性進(jìn)展，比如第一次采用CRISPR-Cas9系統(tǒng)的變種技術(shù)，改變了讀取誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)基因組的方式（由此入選了生物通的2016年生命科學(xué)風(fēng)云人物）。

2013年，亓磊研究組在Cell發(fā)布論文介紹了課題組開發(fā)的基因沉默技術(shù)。研究人員將CRISPR用于基因表達(dá)序列特異性調(diào)控的平臺(tái)，研發(fā)出了一種基于Cas9的基因調(diào)控方法。他們將這個(gè)系統(tǒng)稱為CRISPRi，并指出這種RNA導(dǎo)向的DNA識(shí)別平臺(tái)是基因組范圍內(nèi)基因表達(dá)選擇性抑制的一種簡(jiǎn)單的新方法。

在此基礎(chǔ)上，亓磊研究組研發(fā)了一種稱為CRISPR-基因組組裝（CRISPR-genome organization, CRISPR-GO）的新技術(shù)，這種技術(shù)通過(guò)一種經(jīng)過(guò)修飾的CRISPR蛋白，在三維空間中重新組裝基因組。

亓磊解釋道：“如果說(shuō)CRISPR-Cas9像是把分子剪刀，那么CRISPR-GO就像分子鑷子，能抓住基因組中的特定部分，將它們放置在細(xì)胞核的新位置上。改變這些DNA的位置，就能改變它們的功能?！?/p>

這一研究成果公布在10月11日Cell雜志上。

縮小差距

要想揭開基因組物理細(xì)節(jié)的神秘面紗，并不容易，實(shí)際操作起來(lái)十分繁瑣，但現(xiàn)有的一些技術(shù)可以讓科學(xué)家們進(jìn)入細(xì)胞，了解這些內(nèi)部結(jié)構(gòu)是如何組織的。不過(guò)還是缺少一種能修改這種組織結(jié)構(gòu)的方法，CRISPR-GO就是第一個(gè)為研究人員提供這種功能的方法。

如果解除CRISPR-Cas9的“切割”作用，編輯工具就會(huì)變得更像是一種遞送系統(tǒng)，亓磊研究組利用它通過(guò)可編程的導(dǎo)向RNA將DNA片段遞送到細(xì)胞核中的新位置上。

CRISPR-GO有三個(gè)基本部分。

第一部分是亓磊稱之為重新定位的靶DNA片段所在的“地址”—一段靶向一條互補(bǔ)的結(jié)合RNA的鏈的DNA，第二部分是靶標(biāo)地址，也就是想要將染色質(zhì)移動(dòng)到的細(xì)胞核區(qū)室中的特定DNA部分。最后是其中的“橋（bridge）”，在這種情形下，這就是一種催化劑，能促進(jìn)靶DNA片段移動(dòng)到它在細(xì)胞核中的靶標(biāo)地址。

“孩子們經(jīng)常喜歡建造小鐵路來(lái)幫助火車從一個(gè)車站到另一個(gè)車站，”亓磊說(shuō)，“這與我們?cè)谶@里所做的事情沒(méi)有什么不同?！?/p>

不同的房間，不同的功能

同時(shí)，亓磊也描述了核隔間的功能，這就像是一個(gè)房間，我們家里的每個(gè)房間都有不同的功能，比如廚房是做飯的地方，臥室是睡覺(jué)休息的地方。在細(xì)胞核中，也有同樣的概念。細(xì)胞核中有多個(gè)區(qū)室，它們?cè)诰S護(hù)細(xì)胞功能方面都具有特定的作用。 亓磊等人研究了細(xì)胞核的三個(gè)不同區(qū)域，測(cè)試它們是否能以某種方式改變?nèi)旧|(zhì)的功能（這取決于移動(dòng)的位置）。

研究人員通過(guò)CRISPR-GO，發(fā)現(xiàn)基因能重新定位到細(xì)胞核的一部分上（稱為Cajal體，這是一種無(wú)定形且有些神秘的蛋白質(zhì)和RNA團(tuán)）。

“我們第一次證明Cajal體可以產(chǎn)生直接的基因調(diào)節(jié)作用，在這種情況下抑制基因表達(dá)，”亓磊說(shuō)，“這表明Cajal體在控制轉(zhuǎn)錄方面有一些意想不到的作用?！?/p>

當(dāng)亓磊使用CRISPR-GO將端粒DNA從細(xì)胞核的中間移動(dòng)到邊緣時(shí)，端粒停止生長(zhǎng)，細(xì)胞周期也停止了，細(xì)胞活力下降。相反，當(dāng)端粒移近Cajal體時(shí)，它們又能生長(zhǎng)，并且細(xì)胞活力增加。

第三種應(yīng)用是利用CRISPR-GO形成早幼粒細(xì)胞白血病小體（promyelocytic leukemia body, PML小體）。眾所周知，這種蛋白質(zhì)團(tuán)可以抑制促癌基因。為此亓磊計(jì)劃通過(guò)將其放置于細(xì)胞核中致癌基因的旁邊，測(cè)試它是否可以幫助抑制腫瘤形成。

“CRISPR-GO的另一個(gè)獨(dú)特優(yōu)勢(shì)是我們可以在顯微鏡下實(shí)時(shí)跟蹤染色質(zhì)DNA和核區(qū)室之間的相互作用，”文章的另外一位作者說(shuō)。

雖然利用CRISPR-GO提供的證據(jù)是令人興奮的，但是這項(xiàng)研究仍處于試驗(yàn)階段，在這些研究結(jié)果得到驗(yàn)證之前，還有更多的研究工作需要開展。

“我們對(duì)此感到非常興奮，”亓磊說(shuō)。更為重要的是可以解釋為什么這些基于位置的影響發(fā)生在特定的核區(qū)室，以及根本原因是什么。有一天，這一系列研究將對(duì)人類健康產(chǎn)生重要影響。

來(lái)源：生物通

原文標(biāo)題：

CRISPR-Mediated Programmable 3D Genome Positioning and Nuclear Organization

https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(18)31185-1