論文標題：A Novel Effective and Safe Vaccine for Prevention of Marek’s Disease Caused by Infection with a Very Virulent Plus (vv+) Marek’s Disease Virus（一種新型有效且安全的疫苗，用于預防由強毒力 Plus (vv+) 馬立克氏病病毒感染引起的馬立克氏?。?/p>

期刊：Vaccines

作者：Yifei Liao, Sanjay M. Reddy, Owais A. Khan, Aijun Sun and Blanca Lupiani

發(fā)表時間：16 February 2021

DOI：10.3390/vaccines9020159

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期刊鏈接：

https://www.mdpi.com/journal/vaccines

馬立克氏病病毒 (Marek’s disease virus, MDV) 是一種高度傳染性的α皰疹病毒，屬于皰疹病毒科的狂歡病毒屬。這種病毒引起的馬立克氏病 (Marek’s disease, MD)，會造成免疫抑制、神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及內(nèi)臟器官和皮膚中T細胞淋巴瘤的快速發(fā)作。接種疫苗是一種有效控制馬立克氏病的措施。

較早的研究表明，從馬立克氏病病毒中刪除meq基因會形成一種減毒病毒。當雞受到高毒力野毒株攻擊時，該減毒病毒可以防御馬立克氏病。但是，meq基因缺失的病毒依然能夠明顯地誘導雞體內(nèi)的淋巴器官萎縮。在另一項研究中，研究者發(fā)現(xiàn)vIL8基因的缺失導致接種疫苗的雞喪失了體內(nèi)淋巴器官萎縮的能力。來自得克薩斯農(nóng)工大學的Lupiani博士和Sun博士等研究者依據(jù)上述的研究結果，在Vaccines期刊上發(fā)表了文章，將缺失的meq和vIL8基因進行重組，生成新的馬立克氏病病毒 (686BAC-?Meq?vIL8)。

實驗材料和方法

作者采用兩步的Red介導的重組程序，構建meq和/或vIL8單雙缺失病毒，分別使用免疫熒光和免疫組織化學技術，測定體外生長活力，MDV基因組拷貝數(shù)，重新激活雞體內(nèi)的病毒，以及探討了發(fā)病機理和免疫保護的效果。

結果與討論

圖1顯示meq或vIL8單雙缺失病毒的構建和體外表征 (686BAC-ΔMeq, 686BAC-ΔvIL8, 686BAC-ΔMeqΔvIL8)。RFLP結果表明，獲得的模式與計算機分析預測的模式完全一致，而突變MDV基因組中沒有意外的重排 (圖1B)。圖1C所示，使用PCR產(chǎn)物對meq和vIL8的manipu相關區(qū)域進行了測序，未檢測到意料之外的突變。在感染了CEF的親本和缺失突變病毒中，病毒蛋白pp38的表達和噬菌斑大小相似 (圖1D)。此外，親本686BAC，686BAC-ΔMeq，686BAC-ΔvIL8和686BAC-ΔMeqΔvIL8表現(xiàn)出相似的體外生長動力學 (圖1E)，表明meq和/或vIL8的缺失不影響任何一種在細胞培養(yǎng)中的病毒的生長。

圖1. (A) 血清 1型馬立克氏病病毒 (MDV) 的基因組結構以及meq和vIL8基因的位置。(B) meq和/或vIL8缺失病毒的基因組分析。(C) PCR分析。(D) 免疫熒光法 (IFA)。(E) 體外生長動力學。

圖2是體內(nèi)復制和重新激活meq或vIL8單和雙刪除病毒。從圖中可以看出，體內(nèi)MDV基因組拷貝數(shù)數(shù)據(jù)和pp38表達結果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8顯著減少了雞體內(nèi)的病毒復制，但是并不能消除FFE中的病毒復制。

圖2. (1) meq和vIL8單和雙缺失突變病毒的體內(nèi)復制 (A) 和再激活 (B)。(2) meq和vIL8雙重缺失病毒在已接種雞的淋巴器官和毛囊上皮 (FFE) 中的復制。

關于meq或Vil8單雙缺失病毒接種引起的淋巴器官萎縮和發(fā)病機理的評價，如圖3A所示，與陰性對照雞相比，親本的為686BAC和686BAC-ΔMeq病毒，而不是686BAC-ΔvIL8和686BAC-ΔMeqΔvIL8病毒，在接種雞中引起嚴重了法氏囊和胸腺萎縮。為了進一步評估686BAC-ΔMeqΔvIL8的致病特性，對所有接種和未接種的雞進行了65天的嚴密監(jiān)控。研究結果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8被完全衰減。

圖3. (A) 淋巴器官萎縮。(B) 接種所示病毒或未接種對照組的雞的存活曲線。

圖4是meq和vIL8雙重缺失病毒在MDV母雞陰性 (Ab–) 和陽性 (Ab+) 雞中的保護研究。結果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8可提供與CVI988相當?shù)谋Ｗo，可抵抗vv+ MDV的挑戰(zhàn)。

圖4. meq和vIL8雙重缺失病毒在MDV母雞陰性 (Ab–) 和陽性 (Ab +) 雞中的保護研究。

結 論

體外研究表明，meq和vIL8雙重缺失的重組病毒的復制水平與親本極強毒病毒 (vv+) 相似。體內(nèi)研究表明，在受到由極強毒病毒感染的馬立克氏病病毒的攻擊后，雙重缺失的突變病毒 (686BAC-ΔMeqΔvIL8) 可提供與商業(yè)疫苗株CVI988同等水平的保護作用；與meq空病毒相比，可顯著地減少雞體內(nèi)的淋巴器官萎縮。作者的研究支持雙基因缺失/突變作為一種可用于產(chǎn)生下一代MD疫苗的新策略。

期刊簡介

Vaccines (ISSN 2076-393X, IF 4.086) 是一個國際型開放獲取期刊。期刊主題涵蓋疫苗，抗體，免疫等方面。Vaccines采取單盲同行評審，一審周期約為13.6天，文章從接收到發(fā)表僅需3.4天。

來源：Vaccines