什么是riboEDIT? CRISPR-Cas9體系？
該體系為銳博生物自主開發(fā)的CRISPR-Cas9體系（銳博專利號：108977442A），采用天然復合物系統(tǒng)（crRNA和tracrRNA）進行基因編輯，包括Cas9 mRNA的全RNA體系和基于Cas9蛋白的RNP體系，tracrRNA可實現(xiàn)大規(guī)模合成，靶向DNA目的序列的crRNA可以高通量合成，針對哺乳動物細胞可簡單通過化學轉染或電轉方式進行基因編輯實驗。
riboEDIT? CRISPR-Cas9體系為即用型，不需要自行構建gRNA表達載體，無需在病毒級實驗室中操作，無DNA組分，并且可實現(xiàn)多個crRNA指導下的多靶點編輯，大大簡化前期實驗準備與操作步驟，更適合于高通量細胞水平的基因敲除篩選，還提供具有編輯效率保證的CRISPR-Cas9套裝產(chǎn)品，提供方便、省時、可靠和高效的解決方案。
riboEDIT? CRISPR-Cas9體系優(yōu)勢
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銳博專利技術：優(yōu)化的crRNA、tracrRNA和Cas9 mRNA
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即用型體系，更加易用，適合從小規(guī)模到大規(guī)模高通量篩選
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無需繁瑣克隆構建過程，節(jié)約更多人力和時間
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無需病毒級實驗室，大大降低基因編輯對實驗環(huán)境的要求
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此外，riboEDIT? CRIPSR-Cas9體系相比于質(zhì)粒載體表達Cas9和Cas9穩(wěn)定表達細胞株或慢病毒系統(tǒng)的優(yōu)勢顯著。
首先，riboEDIT? CRIPSR-Cas9的全RNA體系或Cas9蛋白體系相比質(zhì)粒載體或Cas9穩(wěn)定表達細胞株而言，Cas9蛋白為瞬時表達，脫靶效率低、無DNA整合風險和啟動子兼容性問題，大大提高應用安全性。然后，它是即用型體系，通過一步轉染，5-6個工作日即可完成編輯效率檢測，操作簡便，顯著縮短實驗周期。其次，不需要自行構建載體或包裝慢病毒，不需要病毒級的實驗室環(huán)境。再次，在大部分細胞中，比質(zhì)粒表達載體具體更高的基因編輯效率。
riboEDIT? CRISPR-Cas9具有高效的基因編輯效率
Fig.1 MHCC97H細胞共轉染10pmol riboEDIT? crRNA、10pmol riboEDIT? tracrRNA和1ug riboEDIT? Cas9 mRNA，48小時后 riboEDIT? T7EI Enzyme酶切檢測靶位點的剪切效率，候選7個靶基因的剪切條帶及編輯效率。如圖所示，#1#2表示同一基因不同位點設計的2條crRNA。
Fig.2 MHCC97H細胞共轉染6pmol riboEDIT? crRNA、6pmol riboEDIT? tracrRNA和6pmol riboEDIT? Cas9 Protein，48小時后 riboEDIT? T7EI Enzyme酶切檢測靶位點的剪切效率，候選7個靶基因的剪切條帶及編輯效率。如圖所示，#1#2表示同一基因不同位點設計的2條crRNA。
Fig.3 riboEDIT? CRISPR-Cas9 mRNA基因編輯體系與riboEDIT? Cas9 RNP復合物具有等同的靶位點編輯效率。
riboEDIT? CRIPSR-Cas9編輯效率保證套裝和標準套裝
銳博生物提供方便高效的效率保證套裝和標準套裝。效率保證套裝針對人源基因，利用設計軟件挑選評分高的5條crRNA進行合成，基于Cas9 mRNA的體系配置必備試劑，包括tracrRNA、Cas9 mRNA、mRNA轉染試劑、陽性對照crRNA套裝、T7E1酶及配套緩沖液等，提供即用型的基因編輯工具。其中效率保證套裝可以確保MHCC97H細胞的T7E1酶切效率至少1條達到30%以上并提供相應的售后服務，標準套裝不提供任何編輯效率的保證。
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riboEDIT? CRISPR-Cas9 mRNA Set, 20T
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?? riboEDIT? Designed crRNA（設計合成5條crRNA）5*5nmol
?? riboEDIT? tracrRNA, 5nmol
?? riboEDIT? Positive Control crRNA Validation Set for Human, 1 set
?? riboEDIT? mRNA Transfection Reagent 75ul
?? riboEDIT? Cas9 mRNA (0.5ug/ul), 20ug
?? riboEDIT? T7EI Enzyme (10U/ul) , 100U
?? 配套還有緩沖液和無RNA酶水
riboEDIT? Designed crRNA采用銳博生物優(yōu)化的生物信息學設計，客戶無需具備crRNA/sgRNA設計經(jīng)驗，crRNA包含20個與目標DNA序列互補配對的核苷酸（原間隔序列）和與tracrRNA互補配對的重復序列,涵蓋人類和小鼠基因，每個基因設計合成3 – 6段單獨的sgRNA，其他物種crRNA設計需另行評估。
crRNA陽性對照套裝用于檢測基因剪切體系的正確性，該套裝包括陽性對照crRNA、正向引物和反向引物。
化學合成的tracrRNA經(jīng)HPLC純化，能夠抗核酸酶，能與crRNA結合形成crRNA/tracrRNA復合物，共同指導Cas9蛋白切割雙鏈DNA。
riboEDIT? Cas9 mRNA為體外轉錄生成，具有帽子和polyA尾巴結構，編碼載體為人源密碼子優(yōu)化的S. pyogenes Cas9，帶有核定位信號（NLS），C端的一個1XFLAG標簽，5’非翻譯區(qū)(5’UTR)及3’非翻譯區(qū)(3’UTR)，以促進mRNA的翻譯和提高mRNA的穩(wěn)定性，適用于哺乳動物細胞基因編輯。
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在這里，您可以選擇基因編輯效率保證套裝、標準套裝、設計crRNA、陽性對照crRNA驗證套裝、tracrRNA、Cas9 mRNA、 mRNA轉染試劑、Cas9蛋白、T7E1酶等體系產(chǎn)品。
