4月下旬發(fā)表circRNA文獻共計23篇，大部分是研究論文，還發(fā)布了一個circRNA疾病相關數據，詳解官網歷史文章：疾病相關環(huán)形RNA數據庫circRNA Disease發(fā)布；外泌體中circRNA研究論文2篇，其中一篇與肝癌相關，解讀鏈接：外泌體研究之砷慢性中毒會通過外泌體誘發(fā)肝癌；下面我們一起詳細了解下另外一篇胰腺癌細胞來源外泌體中circ-PDE8A的作用機制文章。

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胰腺導管腺癌（PDAC）是胰腺癌中最常見的一種惡性疾病，5年生存率低于5%，致死率高于其他腫瘤，可謂癌癥之王，大多數胰腺癌病人確診后就是晚期，如何提高PDAC的早期診斷力，一直是癌癥研究人員奮斗的方向之一。外泌體和circRNA是最近分子診斷標記物的研究熱門，該論文的研究者在高侵襲性的PDAC細胞來源的外泌體中發(fā)現circ-PDE8A，并深入探討了circ-PDE8A在PDAC發(fā)生發(fā)展中的作用，下面我們一起解讀下這篇研究論文的結果。

圖：外泌體中的circPDE8A參與PDAC侵襲過程中的作用機制模式圖

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1、證實PDAC腫瘤外泌體中circ-PDE8A的存在和特征

圖1、A：實驗研究技術路線，構建Hs766T低轉移和Hs766T-L2高轉移細胞模型，分離外泌體，提取RNA進行circRNA芯片篩選；B-C：Hs766T-L2高轉移性細胞及外泌體中幾個circRNA的qRT-PCR驗證；D-F：circRNA過表達載體和siRNA及PCR引物設計示意圖；

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圖2、G：BxPC-3細胞中驗證circ-PDE8A的過表達和siRNA干擾效率；H-I:過表達circ-PDE8A后Hs766T細胞侵襲能力改變；J-M:qPCR驗證circ-PDE8A在胰腺癌細胞Hs766T中表達特性；

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2、胰腺癌患者樣本中高表達的circ-PDE8A與癌癥進展及預后相關

圖3、A-C:circ-PDE8A及線性PDE8A基因在胰腺癌細胞和組織樣本中的相對表達水平分析；D-F：5對淋巴結轉移及非淋巴結轉移PDAC患者樣本中circ-PDE8A表達水平變化；

圖4、G-H：87個PDAC患者中circ-PDE8A及線性PDE8A基因的KM生存曲線分析；

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3、circ-PDE8A通過激活MET促進PDAC細胞侵襲

圖5、劃痕和transwell實驗表明過表達circPDE8A顯著促進PDAC細胞增殖、遷移和侵襲；

圖6、過表達circ-PDE8A后，MET蛋白及相關EMT標志蛋白表達改變顯著增高；

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4、證實circ-PDE8A可吸附miR-338發(fā)揮作用

圖7、A-B免疫熒光觀測circPDE8A定位細胞質；C:circPDE8與mir-338表達負相關；D-F:S生物信息學和熒光素酶報告基因實驗驗證circPDE8與mir-338存在互作結合位點；G：RNA免疫共沉淀實驗（RIP)驗證circPDE8與mir-338互作；

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圖8、circRNA pull-down實驗，分別設計circPDE8A和miR-338的生物素探針，驗證是否可以互相拉取對方，足以證明circPDE8A和miR-338的直接相互作用；

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5、示蹤外泌體與PDAC細胞通訊

圖9：外泌體電鏡及WB鑒定，Dli標記外泌體和胰腺癌細胞共培養(yǎng)并激光共聚焦顯微鏡觀測；

圖10、提取過表達circPDE8A的胰腺癌細胞來源的外泌體與BxPC3、Capan-1細胞共培養(yǎng)后，WB檢測AKT通路相關蛋白表達變化，E-F體內實驗表明exosmes共培養(yǎng)后的BxPC3細胞可形成原為瘤；

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參考文獻列表

文 | circRNA 吉賽生物

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