4月下旬發(fā)表circRNA文獻(xiàn)共計(jì)23篇，大部分是研究論文，還發(fā)布了一個(gè)circRNA疾病相關(guān)數(shù)據(jù)，詳解官網(wǎng)歷史文章：疾病相關(guān)環(huán)形RNA數(shù)據(jù)庫(kù)circRNA Disease發(fā)布；外泌體中circRNA研究論文2篇，其中一篇與肝癌相關(guān)，解讀鏈接：外泌體研究之砷慢性中毒會(huì)通過(guò)外泌體誘發(fā)肝癌；下面我們一起詳細(xì)了解下另外一篇胰腺癌細(xì)胞來(lái)源外泌體中circ-PDE8A的作用機(jī)制文章。

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胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）是胰腺癌中最常見(jiàn)的一種惡性疾病，5年生存率低于5%，致死率高于其他腫瘤，可謂癌癥之王，大多數(shù)胰腺癌病人確診后就是晚期，如何提高PDAC的早期診斷力，一直是癌癥研究人員奮斗的方向之一。外泌體和circRNA是最近分子診斷標(biāo)記物的研究熱門(mén)，該論文的研究者在高侵襲性的PDAC細(xì)胞來(lái)源的外泌體中發(fā)現(xiàn)circ-PDE8A，并深入探討了circ-PDE8A在PDAC發(fā)生發(fā)展中的作用，下面我們一起解讀下這篇研究論文的結(jié)果。

圖：外泌體中的circPDE8A參與PDAC侵襲過(guò)程中的作用機(jī)制模式圖

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1、證實(shí)PDAC腫瘤外泌體中circ-PDE8A的存在和特征

圖1、A：實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)路線(xiàn)，構(gòu)建Hs766T低轉(zhuǎn)移和Hs766T-L2高轉(zhuǎn)移細(xì)胞模型，分離外泌體，提取RNA進(jìn)行circRNA芯片篩選；B-C：Hs766T-L2高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞及外泌體中幾個(gè)circRNA的qRT-PCR驗(yàn)證；D-F：circRNA過(guò)表達(dá)載體和siRNA及PCR引物設(shè)計(jì)示意圖；

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圖2、G：BxPC-3細(xì)胞中驗(yàn)證circ-PDE8A的過(guò)表達(dá)和siRNA干擾效率；H-I:過(guò)表達(dá)circ-PDE8A后Hs766T細(xì)胞侵襲能力改變；J-M:qPCR驗(yàn)證circ-PDE8A在胰腺癌細(xì)胞Hs766T中表達(dá)特性；

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2、胰腺癌患者樣本中高表達(dá)的circ-PDE8A與癌癥進(jìn)展及預(yù)后相關(guān)

圖3、A-C:circ-PDE8A及線(xiàn)性PDE8A基因在胰腺癌細(xì)胞和組織樣本中的相對(duì)表達(dá)水平分析；D-F：5對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移PDAC患者樣本中circ-PDE8A表達(dá)水平變化；

圖4、G-H：87個(gè)PDAC患者中circ-PDE8A及線(xiàn)性PDE8A基因的KM生存曲線(xiàn)分析；

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3、circ-PDE8A通過(guò)激活MET促進(jìn)PDAC細(xì)胞侵襲

圖5、劃痕和transwell實(shí)驗(yàn)表明過(guò)表達(dá)circPDE8A顯著促進(jìn)PDAC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；

圖6、過(guò)表達(dá)circ-PDE8A后，MET蛋白及相關(guān)EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)改變顯著增高；

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4、證實(shí)circ-PDE8A可吸附miR-338發(fā)揮作用

圖7、A-B免疫熒光觀(guān)測(cè)circPDE8A定位細(xì)胞質(zhì)；C:circPDE8與mir-338表達(dá)負(fù)相關(guān)；D-F:S生物信息學(xué)和熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證circPDE8與mir-338存在互作結(jié)合位點(diǎn)；G：RNA免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（RIP)驗(yàn)證circPDE8與mir-338互作；

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圖8、circRNA pull-down實(shí)驗(yàn)，分別設(shè)計(jì)circPDE8A和miR-338的生物素探針，驗(yàn)證是否可以互相拉取對(duì)方，足以證明circPDE8A和miR-338的直接相互作用；

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5、示蹤外泌體與PDAC細(xì)胞通訊

圖9：外泌體電鏡及WB鑒定，Dli標(biāo)記外泌體和胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)并激光共聚焦顯微鏡觀(guān)測(cè)；

圖10、提取過(guò)表達(dá)circPDE8A的胰腺癌細(xì)胞來(lái)源的外泌體與BxPC3、Capan-1細(xì)胞共培養(yǎng)后，WB檢測(cè)AKT通路相關(guān)蛋白表達(dá)變化，E-F體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明exosmes共培養(yǎng)后的BxPC3細(xì)胞可形成原為瘤；

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參考文獻(xiàn)列表

文 | circRNA 吉賽生物

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