3 月 30 日，一項(xiàng)來自深圳市第三人民醫(yī)院肝病研究所張政等人發(fā)表的研究稱，目前商用試劑盒檢測帶來的假陰性可能是導(dǎo)致 “復(fù)陽” 的原因。

研究人員分析了于 2020 年 1 月 23 日 – 2 月 25 日出院的 262 例新冠患者患者發(fā)現(xiàn)，截至 2020 年 3 月 10 日，所有患者至少隨訪 14 天，“復(fù)陽”患者占比為 14.5%（ 38/262 例）。

此外，他們在使用張鋒實(shí)驗(yàn)室超靈敏的 SHERLOCK （與神探夏洛克 · 福爾摩斯同名的檢測技術(shù)）試劑盒檢測后發(fā)現(xiàn)，目前商業(yè)試劑盒檢測結(jié)果為陰性的 24 個(gè)樣品中，有 18 個(gè)樣本呈陽性。這提示已經(jīng)治愈的新冠肺炎患者仍可能攜帶新冠病毒。

這個(gè)發(fā)現(xiàn)為恢復(fù)期新冠患者的有效管理提供了關(guān)鍵信息。這項(xiàng)研究發(fā)表在了預(yù)印本網(wǎng)站 medRxiv。

更靈敏的檢測

這項(xiàng)超靈敏的核酸檢測技術(shù)來自美國麻省理工學(xué)院張鋒實(shí)驗(yàn)室研發(fā)，名為 SHERLOCK 試劑盒，而商用試劑盒來自中國食品藥品監(jiān)督管理局（CFDA）批準(zhǔn)的商業(yè)試劑盒。商業(yè)試劑盒的檢測下限為 500 拷貝每毫升樣品，而 SHERLOCK 試劑盒則為 100 拷貝每毫升。

就在今年 2 月 15 日，美國麻省理工學(xué)院發(fā)布消息稱，張鋒實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的核酸檢測系統(tǒng) SHERLOCK 有望在 1 小時(shí)內(nèi)實(shí)現(xiàn)新型冠狀病毒檢測。張鋒實(shí)驗(yàn)室公布了詳細(xì)操作流程，并表示可向新冠病毒研究者提供檢測套件。

圖丨張鋒團(tuán)隊(duì) SHERLOCK 檢測冠狀病毒的論文（來源：bioarxiv）

SHERLOCK 系統(tǒng)基于基因編輯工具 CRISPR-Cas13，DeepTech 曾在 2 月時(shí)報(bào)道過這一檢測方法。SHERLOCK 系統(tǒng)最初曾在多種人類樣本（如唾液）中發(fā)現(xiàn)寨卡、登革熱等病毒的 RNA 序列，甚至一些與癌癥突變相關(guān)的序列，其對 RNA 和 DNA 的檢測靈敏度都達(dá)到了單分子級。

為更好地使用 SHERLOCK，張鋒團(tuán)隊(duì)開發(fā)了類似于驗(yàn)孕棒一樣的試紙檢測方法：不需要任何特殊設(shè)備，只需一張?jiān)嚰垼琒HERLOCK 系統(tǒng)就能顯示出病毒感染檢測結(jié)果，非常易于使用。

具體到用在新冠病毒的檢測中，張鋒團(tuán)隊(duì)則為其設(shè)計(jì)了能與新冠病毒特異性結(jié)合的 RNA：其中一種 RNA 能識別新冠病毒的 S 基因，另一種 RNA 則識別 Orf1ab 基因。其作用原理是：一旦找到新冠病毒， RNA 上附著的強(qiáng)力剪切酶（Cas13a）就會(huì)被釋放，切斷病毒基因并形成視覺可見的檢測結(jié)果。因此該技術(shù)只需 1 小時(shí)就能判斷是否存在新冠病毒。

圖 | SHERLOCK 試紙檢測結(jié)果展示（來源：Nature）

武漢大學(xué)藥學(xué)院一位不愿具名的教授告訴 DeepTech，張鋒的檢測技術(shù)雖然使用便捷，但需要防止假陽性。因?yàn)樵诟哽`敏的檢測技術(shù)中，若核酸擴(kuò)增（PCR）過程不能密閉進(jìn)行，就容易將核酸污染誤讀為陽性。

難纏的“復(fù)陽”

在上述研究中，截至 3 月 10 日有 38 例 “復(fù)陽” 患者出現(xiàn)，占同期隨訪患者的 14.5%。其特征是，與非 “復(fù)陽” 患者相比，“復(fù)陽”患者中輕癥比例更高。更多的 “復(fù)陽” 患者在住院期間僅僅有輕微癥狀，合并癥和發(fā)燒較少，但上呼吸道癥狀多。重癥患者并沒有發(fā)生“復(fù)陽”。

“復(fù)陽”患者的另一個(gè)特點(diǎn)是絕大部分小于 60 歲，且 “復(fù)陽” 患者再次入院后無明顯病程進(jìn)展。

科學(xué)家通常認(rèn)為病毒載量高低和疾病結(jié)局有關(guān)。中度癥狀的 “復(fù)陽” 患者在發(fā)病后 2-3 周內(nèi)檢測轉(zhuǎn)為陰性，而非 “復(fù)陽” 患者則超過 3 周。作者推測說，中度癥狀的 “復(fù)陽” 患者轉(zhuǎn)陰時(shí)間縮短可能影響了適應(yīng)性免疫的持續(xù)性。

“復(fù)陽”患者和非 “復(fù)陽” 患者的血漿中抗體水平相似。作者稱，未來的研究應(yīng)該調(diào)查患者的免疫反應(yīng)，這些反應(yīng)常?？蓻Q定臨床結(jié)果。

不過，在這些 “復(fù)陽” 患者中，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的病情進(jìn)展或復(fù)發(fā)的臨床證據(jù)，包括 CT 顯像和實(shí)驗(yàn)室檢查。這些 “復(fù)陽” 患者也無需使用抗生素、類固醇、抗病毒藥和吸氧，且其炎癥反應(yīng)明顯降低。也就是說，即使檢測到患者“復(fù)陽”，其病情也不會(huì)加重。

為何會(huì)出現(xiàn) “復(fù)陽” 患者？許多專家認(rèn)為可能有多種因素相關(guān)，檢測技術(shù)導(dǎo)致的假陰性只是因素之一。

間歇性病毒釋放和病毒分布也是主要的病毒學(xué)因素。比如新冠病毒在消化道和糞便中可能長時(shí)間存留，這也是深圳市第三人民醫(yī)院自 2020 年 2 月 22 日起將肛拭子檢測陰性納入出院評估標(biāo)準(zhǔn)的原因。然而作者指出，這并不能顯著減少患者 “復(fù)陽” 的發(fā)生。

武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科主任李艷在接受 DeepTech 采訪時(shí)表示，取樣部位可能會(huì)影響到病毒檢測。她更認(rèn)可鼻拭子取樣，因?yàn)檠适米尤拥臅r(shí)候，可能會(huì)遇到口水或刮到舌頭，這都可能讓取樣不準(zhǔn)確。

更重要的是，這些 “復(fù)陽” 患者出院后未引起新的感染。21 例與 “復(fù)陽” 患者密切接觸者的新冠病毒核酸檢測均為陰性，未見可疑臨床癥狀。

如何防“復(fù)陽”

除了武漢和廣東，四川、湖北、湖南、天津、陜西多地相繼有 “復(fù)陽” 患者的報(bào)道。

據(jù) 3 月 3 日頒發(fā)的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》，患者出院需滿足如下標(biāo)準(zhǔn)：痰、鼻咽拭子等連續(xù)兩次呼吸道標(biāo)本核酸檢測陰性（采樣時(shí)間至少間隔 24 小時(shí)），體溫恢復(fù)正常三天以上，呼吸道癥狀明顯好轉(zhuǎn)，肺部影像學(xué)顯示急性滲出性病變明顯吸收好轉(zhuǎn)。而深圳市第三人民醫(yī)院還將肛拭子檢測陰性納入出院評估標(biāo)準(zhǔn)。

3 月 22 日，湖北省衛(wèi)健委副主任涂遠(yuǎn)超接受湖北日報(bào)采訪時(shí)稱，對于在復(fù)診中發(fā)現(xiàn)核酸檢測 “復(fù)陽” 病例，有癥狀的患者由接診醫(yī)療機(jī)構(gòu)通知“120”，將患者轉(zhuǎn)運(yùn)至現(xiàn)有定點(diǎn)醫(yī)院進(jìn)行治療，再次達(dá)到出院標(biāo)準(zhǔn)后予以出院，并進(jìn)行 2 周隔離康復(fù)觀察；對于無癥狀的患者，由接診醫(yī)療機(jī)構(gòu)通知所在社區(qū)，由社區(qū)將患者轉(zhuǎn)運(yùn)至有關(guān)集中隔離康復(fù)點(diǎn)，進(jìn)行 2 周集中隔離康復(fù)觀察，達(dá)到解除隔離標(biāo)準(zhǔn)后解除隔離。

“復(fù)陽”患者在首次確診時(shí)，已按照國家相關(guān)要求納入確診病例上報(bào)，因此復(fù)診時(shí)不再作為新增確診病例重復(fù)上報(bào)。

涂遠(yuǎn)超表示，根據(jù)國家衛(wèi)生健康委醫(yī)政醫(yī)管局對 “復(fù)陽” 患者監(jiān)測情況及專家初步研究來看，目前暫未發(fā)現(xiàn) “復(fù)陽” 患者傳染人的現(xiàn)象。

據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》，在出院后注意事項(xiàng)中指出，鑒于有少數(shù)出院患者出現(xiàn)核酸檢測復(fù)檢陽性的問題，將此前版本的 “應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行 14 天自我健康狀況監(jiān)測” 改為“應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行 14 天的隔離管理和健康狀況監(jiān)測”，同時(shí)要求佩戴口罩，有條件的居住在通風(fēng)良好的單人房間，減少與家人的近距離密切接觸，分餐飲食，做好手部衛(wèi)生，避免外出活動(dòng)。

那么，更靈敏的核酸檢測技術(shù)有沒有必要普及呢？李艷說，盡管張鋒的檢測技術(shù)更靈敏，但因其沒有商業(yè)化只能用于科研，而無法用于臨床檢測。在臨床實(shí)踐中，可以用抗體檢測來彌補(bǔ)核酸檢測假陰性的漏洞。

上述不愿具名的武大教授認(rèn)為，更高靈敏的檢測技術(shù)可以作為商用試劑盒檢測技術(shù)的補(bǔ)充，尤其是對于有癥狀患者屢次測試為陰性的情況下，可以用作對比測試。

來源：麻省理工科技評論