在生命科學(xué)領(lǐng)域，基因組編輯技術(shù)的迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用，為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供強(qiáng)大的技術(shù)支撐。不過(guò)，大片段DNA編輯一直面臨重大挑戰(zhàn)，對(duì)數(shù)千乃至數(shù)百萬(wàn)堿基的精準(zhǔn)操縱更是基因編輯領(lǐng)域的核心難題，備受關(guān)注。

來(lái)自中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所的消息說(shuō)，該所高彩霞研究員團(tuán)隊(duì)最新研發(fā)出一種新型可編程的染色體編輯技術(shù)(PCE)。該技術(shù)在動(dòng)植物中實(shí)現(xiàn)了從千堿基到兆堿基級(jí)別DNA的多類型染色體精準(zhǔn)操縱，顯著提升了真核生物基因組的操縱尺度和能力。

利用大片段DNA精準(zhǔn)操縱技術(shù)，研究人員不僅能實(shí)現(xiàn)多基因疊加編輯，還可通過(guò)操控基因組結(jié)構(gòu)變異，為作物性狀改良和遺傳疾病治療開(kāi)辟新路徑。同時(shí)，該技術(shù)有望推動(dòng)新型育種策略的發(fā)展，例如通過(guò)操縱遺傳連鎖、調(diào)控重組頻率實(shí)現(xiàn)育性控制，以及消除連鎖累贅，充分釋放野生種質(zhì)資源中優(yōu)異等位基因的育種潛力。此外，精準(zhǔn)染色體編輯技術(shù)的突破將加速人工染色體構(gòu)建，在合成生物學(xué)等新興領(lǐng)域也有重要的應(yīng)用前景。

這項(xiàng)攻克大片段DNA精準(zhǔn)編輯的重要成果論文，北京時(shí)間4日深夜在國(guó)際知名學(xué)術(shù)期刊《細(xì)胞》上線發(fā)表。審稿人評(píng)價(jià)認(rèn)為，中國(guó)團(tuán)隊(duì)發(fā)表的研究工作，代表了基因工程領(lǐng)域的重大突破，在育種和基因治療方面具有巨大的應(yīng)用潛力。

論文通訊作者高彩霞介紹說(shuō)，以基因編輯工具CRISPR及其衍生技術(shù)為代表的編輯系統(tǒng)，通過(guò)可編程的向?qū)NA(核糖核酸)引導(dǎo)Cas9等核酸酶靶向基因組特定位點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于特定堿基和短片段DNA的精準(zhǔn)編輯。但針對(duì)大片段DNA編輯，現(xiàn)有工具在編輯效率、尺度、精準(zhǔn)性及類型多樣性等方面仍存在明顯不足。

研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，位點(diǎn)特異性重組酶(Cre-Lox)系統(tǒng)具有染色體水平DNA操縱潛力，其原理是在基因組中引入Lox序列后，由Cre重組酶介導(dǎo)Lox位點(diǎn)之間的DNA重組來(lái)實(shí)現(xiàn)全基因組范圍內(nèi)的遺傳操縱，但Cre-Lox系統(tǒng)的應(yīng)用受到3個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題的制約。

高彩霞指出，在本項(xiàng)研究中，研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建出系統(tǒng)性技術(shù)路徑，逐一突破3項(xiàng)限制，并通過(guò)技術(shù)的集成優(yōu)化，成功構(gòu)建PCE與RePCE兩個(gè)可編程染色體編輯系統(tǒng)，可對(duì)不同Lox位點(diǎn)的插入位置和方向進(jìn)行靈活編程，實(shí)現(xiàn)堿基從千比特(kb)到兆比特(Mb)尺度的大片段DNA精準(zhǔn)無(wú)痕操縱。

研究團(tuán)隊(duì)表示，他們?cè)趧?dòng)植物細(xì)胞中，利用新研發(fā)的系統(tǒng)已成功實(shí)現(xiàn)18.8kb超大片段DNA的定點(diǎn)整合、5kb序列的定向替換、12Mb的染色體倒位、4Mb的染色體刪除及整條染色體的易位。他們還利用新型大片段DNA精準(zhǔn)操縱技術(shù)，成功創(chuàng)制含315kb精準(zhǔn)倒位的抗除草劑水稻種質(zhì)，展示出其廣泛應(yīng)用前景。

來(lái)源：中新網(wǎng)